Sadržaj
Analiza lančane reakcije polimeraze (PCR) laboratorijska je tehnika. Svrha PCR testiranja je pronaći male količine DNA u uzorku, koristeći postupak poznat kao pojačanje. Tijekom PCR amplifikacije, DNA koja se zanima kopira se više puta dok je nema dovoljno za analizu i detekciju. Na primjer, PCR se može koristiti za identificiranje malih količina DNA iz organizama koji uzrokuju gonoreju ili klamidiju prisutni u uzorku urina.Kako djeluje PCR?
Prvi korak PCR-a je stvaranje početnice. To su kratke sekvence DNA koje se podudaraju s krajevima uzorka DNA koji pokušavate otkriti. Oni su trik u pronalaženju, pojačavanju i otkrivanju određenog dijela DNK. Taj se dio DNA može koristiti za identifikaciju patogena. Također se može koristiti za rad poput otkrivanja gena za rezistenciju na antibiotike.
Nakon što ste dobili početnice, sljedeći korak u PCR-u je zagrijavanje uzorka tako da se dvolančana DNA odvoji u dvije pojedinačne niti - to se naziva denaturacija. Zatim početnicekombiniraju se s uzorkom DNA. Nakon ovoga, DNA polimeraza koristi se za započinjanje replikacije DNA na mjestu primera. Konačno, DNA se zagrijava kako bi se još jednom odvojile niti. Time čitav PCR postupak započinje iznova.
Količina DNA segmenta od interesa koji je prisutan u uzorku povećava se eksponencijalno sa svakim PCR ciklusom. U prvom ciklusu jedna kopija postaje dvije. Tada dvije kopije postaju četiri, a zatim postaju osam itd. Ovaj eksponencijalni rast znači da je općenito potrebno samo 20 do 40 ciklusa da bi se utvrdilo je li dotična DNA prisutna. (Ako je DNA prisutna, dovoljno je i 20-40 ciklusa da se dobije dovoljan uzorak za analizu).
Svi koraci lančane reakcije polimeraze - denaturacija DNA, nanošenje početnica i produženje DNA - događaju se na različitim temperaturama. To znači da se nakon sastavljanja početne smjese koracima može upravljati postupkom poznatim kao termocikliranje. Termocikliranje znači da se temperatura održava na potrebnim razinama dovoljno dugo da se dogodi svaki korak. Dakle, PCR je učinkovit način pojačavanja količine ciljne DNA. Zapravo se to može postići u jednoj epruveti s malo potrebe za ljudskom intervencijom.
Lančana reakcija polimeraze predstavljala je revoluciju u biološkoj tehnici kada je prvi put razvijena početkom 1980-ih. Tvorac PCR-a, Kary Mullis, dobio je Nobelovu nagradu za kemiju za svoj rad 1993. godine.
Zašto je PCR relevantan za testiranje spolno prenosivih bolesti
Lančana reakcija polimeraze i srodne tehnike poput lančana reakcija ligaze, pokazuju se kao sve važniji za testiranje spolno prenosivih bolesti. To je zato što ove tehnike mogu izravno identificirati male količine virusne DNA ili RNA u uzorcima. Utvrđivanje genetskog koda patogena ne zahtijeva da patogen bude živ, za razliku od bakterijske kulture ili virusne kulture. Također ne zahtijeva da se infekcija dogodila dovoljno dugo da bi ljudi razvili uočljivu reakciju antitijela (način na koji infekcije otkriva ELISA.) To znači da PCR tehnike ponekad mogu otkriti bolesti ranije od ostalih testova. Još je bolje da se spolno prenosive bolesti mogu otkriti bez potrebe da se brine o održavanju uzoraka na životu ili testiranju u točno pravo vrijeme.
Najbolji testovi za spolno prenosive bolesti kod kuće